Chào tất cả,
Tình hình là trong quá trình sử dụng HPLC đầu dò UV trong phân tích, đối với hợp chất mới hoàn toàn chưa có quy trình tui đem chạy phổ UV để xác định bước sóng nào có độ hấp thu cực đại :hutthuoc( Phổ UV cho thấy chất này có bước sóng hấp thu cực đại là 215nm và một đỉnh nữa ở 254nm . Đây là hợp chất màu vàng, nếu dùng sắc ký lớp mỏng kiểm tra sẽ hấp thu bước sóng ở 254nm. Đầu dò tui có tính năng dual mode nên có thể kiểm tra ở cùng lúc 2 bước sóng.
Kết quả là đối với bước sóng 254 thì chất cho 1 pic, cũng cùng thời gian đó bước sóng 215 cho thấy xuất hiện 2 pic :nghe (
Vậy là sao ? Theo tui nghĩ do ở bước sóng 215 có độ hấp thu cao hơn nên pic sẽ cao hơn khi sử dụng bước sóng 254 chứ không thể ra 2 pic được. Ví dụ ở bước sóng 254 cho pic bắt đầu ở 9 phut và kết thúc ở 10p . Thì đáng lẽ ở bước sóng 215 sẽ cho pic bắt đầu cũng ở 9p và kết thúc ở 10p nhưng cao hơn nhiều, đằng này trong khoảng 9p-10p nó lại xuất hiện 2 đỉnh xa nhau như 2 pic, vậy đó có phải là hai chất không :24h_104:
Không thể giải thích được, có vị cao nhân nào giúp tui với :021_002:
Vấn đề này khá lý thú, nhưng tôi cần thêm thông tin:
Bạn nói chất phân tích này màu vàng (chưa biết có tinh khiết hay không?) cho cực đại hấp thu tại 215 nm và 254 nm trên UV (dĩ nhiên còn một peak khác kém nhạy hơn ở vùng 390-420 nm). Vậy độ nhạy của 2 peaks này với nhau thế nào? Cụ thể trên phổ UV bạn scan, tại 215 nm thì có độ hấp thu bao nhiêu Abs và tại 254 nm thì độ hấp thu là bao nhiêu Abs?
Khi chạy trên HPLC, peak xuất hiện trong khoảng retention time khoảng 9-10 phút. Trong khoảng thời gian này nếu đo tại 254 nm thì chỉ có 1 peak! Xin hỏi peak này hình dạng thế nào? có đối xứng? đỉnh peak nhọn hay tròn?. Nếu đo tại 215 nm thì xuất hiện 2 peaks? Xin hỏi cụ thể là 2 peak tách rõ nhau (tới đường nền) hay 1 peak mà có 2 đỉnh (túc là có tách mà chưa tốt?), nếu là 1 peak mà có 2 đỉnh thì mức độ tách tới đâu (tức là mới nhú lên 2 đỉnh, tách 1/5 , 1/4 hay 1/2… so với chiều cao peak?)? Độ hấp thu Abs của peak đó tại mỗi bước sóng là bao nhiêu.
Với những câu hỏi này, tôi hy vọng có thêm thông tin cụ thể hơn.
Thân ái
Nếu phần mềm của bạn có chức năng 3D thì sao bạn không thử mở ra xem nhỉ! Nếu bạn thấy peak 215nm không phải hình nón mà là bị kéo thuôn dài xuống chân peak theo trục Z thì có thể đây là hiện tượng overlay lắm chứ. Nếu đúng như vậy thì có thể bạn đang sở hữu bộ đồng phân quang học của 1 chất nào đó. Cái này hay nha vì mình nhớ không nhầm thì bạn đang làm HCTN, bạn đem thử hoạt tính sinh học đi, có gì mới thông báo thêm để anh em mừng với. Good luck!
Cám ơn đã hướng dẫn, nhưng đầu dò này không phải là đầu dò PDA xem được ở dạng 3D :018: Đầu dò này đơn giản chỉ dò được ở hai bước sóng thôi. Máy HPLC theo quy định là nội bất xuất ngoại bất nhập :tuongquan ( vì sợ virus ) nên tui vẽ minh họa cái sắc ký đồ thử, hồi đó thấy hiện tượng này lạ nên cụng chụp lại rồi. Ngày xưa trong phân tích cũng có nghe chuyện là với đầu dò UV nếu không chọn đúng bước sóng khảo sát thì pic sẽ bị chẻ đôi ở đầu :hutthuoc( nhưng chưa thấy bao giờ. Thông tin về chất này đây không hẳn là một chất :nghe ( nếu sắc ký đồ như dạng thứ hai thì có thể giải thích được là " đây có thể là hai chất gồm một chất hấp thu ở vùng 254 và một chất khác ở kế bên không hấp thu ở vùng 254 mà ở vùng 215. Nhưng như dạng 1 thì bó tay :24h_104:
Sắc ký đồ dạng thứ 1 :
chào bạn Shadow
Mình rất muốn thảo luận đáp án cho vấn đề của bạn, nhưng có lẽ chúng ta có hơi ít thông tin nhỉ.
Theo mình thì sự xuất hiện 2 peak trên sắc ký đồ 99% là do 2 chất, bạn có thể kiểm chứng điều này bằng cách thu lấy phổ UV của từng peak bằng cách dùng Detector PDA hoặc chức năng scan phổ UV của Detector, hay thay đổi tỷ lệ pha dộng để quan sát độ phân giải của 2 peak.
À, điều bạn cho rằng khi 2 peak chập với nhau thì ko thể có hình dạng cân đối này là chưa chính xác
bởi vì chiều cao của peak phụ vào bước sóng bạn set up trên Detector và nồng độ của chất, với sự thay đổi tương ứng của 2 yếu tố này, sắc ký đồ của bạn có thể là 1 peak hay 2 peak, cân xứng hay ko cân xứng, kéo đầu hay kéo đuôi…
Rất vui được trao đổi với bạn
Chào mọi nguời Không hiểu sao ai cũng nói có ích thông tin là sao tui không hiểu, thông tin chỉ đơn giản như vầy đâu còn gì nữa :hutthuoc(
Nói tóm tắt lại như vầy !
Một chất ( không biết là một hay hai chất <- vì đây là kiểm tra độ tinh khiết của nó mà ), trước khi kiểm tra bằng HPLC đầu dò UV ( có chức năng dual mode, có nghĩa là có thể kiểm tra cùng lúc ở 2 bước sóng khác nhau * khác đầu PDA nghe ).
Chất này kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng hấp thu UV254nm -> chất này chắc chắn sẽ hiện lên nếu set bước sóng 254nm cho đầu dò UV. Tuy nhiên để chắc ăn chất này được đưa vào máy UV và cho kết quả dạng như sau
Dựa vào kết quả này KTV set kiểm tra ở hai bước sóng 215-254. Và sắc ký đồ trên là kết quả sau khi kiểm tra, theo tui nghĩ kết quả đáng lẽ nếu 1 chất thì phải ở dạng này
Hoặc nếu là hai chất phải ở dạng này
Không thể có dạng như trường hợp nêu ở trên được, vậy mà mình cũng gặp mấy lần, thật không thể hiểu nổi :018:
Tôi hỏi rất kỹ các thông tin về độ nhạy của các peak (mà bạn chưa trả lời) vì tôi nghĩ có thể có trường hợp như thế này: mẫu của bạn có 2 chất nhưng có cấu trúc khác nhau xa. Gần như chất hữu cơ nào cũng khá nhạy ở 215 nm nhưng có thể nhạy hay không nhạy ở 254 nm. Thường thì độ nhạy của chất ở 254 nm tùy thuộc vào mạch liên hợp pi-pi của vòng benzene và các nhóm thế trên đó nữa. Do độ nhạy ở 215 nm khá cao nên chúng ta có thể phân biệt rất rõ nếu có sự thay đổi độ hấp thu (dù nhỏ) theo thời gian lưu –> 2 peaks. Còn tại 254 nm,nếu không nhạy lắm thì ta khó thấy sự thay đổi nhỏ này và cũng không thấy peak có shoulder mà thường chỉ thấy 1 peak có đỉnh tròn mà thôi.
Thân ái
Không hiểu sao ai cũng nói có ích thông tin là sao tui không hiểu, thông tin chỉ đơn giản như vầy đâu còn gì nữa :hutthuoc(
Nói tóm tắt lại như vầy !