Em đang định định lượng hổn hợp axit amin bằng ninhydrin, em đọc tài liệu tháy cần có dung dịch chuẩn leuxin nữa để xây dựng đường chuẩn phải không ah? Nhưng em cũng mơ hồ lắm về cách định lượng này , ai biết giúp em với nha. Em cảm ơn rất nhìu.
Phản ứng ninhydrin là phản ứng màu, dùng để định tính và định lượng axit amin, imino axit và amin. Khi đun nóng ninhydrin trong môi trường kiềm với chất có nhóm chức amin bậc 1 sẽ thu được sản phẩm có màu tím xanh có maximum hấp thụ ở 570 nm. Mật độ quang của sản phẩm thu được tuyến tính phụ thuộc vào số lượng nhóm amin tự do. Dựa vào tính chất này người ta có thể định tính được axit amin. Trước hết ta cần một đường chuẩn (đường phụ thuộc mất độ quang của dung dịch thu được sau phản ứng ninhydrin vào nồng độ của axit amin trong dung dịch). Để làm được điều này bạn cần chuẩn bị một số dung dịch chuẩn với nồng độ axit amin xác định. Cho các dung dịch này tham gia hết trong phản ứng ninhydrin. Sau đó đo mật độ quang của các dung dịch thu được ở bước sóng 570 nm. Vẽ đường chuẩn - là sự phụ thuộc của mật độ quang vào nồng độ axit amin. Nồng độ axit amin trong các dung dịch phân tích bạn có thể xác định khi biết mật độ quang sản phẩm của nó trong phản ứng ninhydrin va so với đường chuẩn. Giá trị mật độ quang tối ưu nằm trong khoảng 0.2-0.7. Nên để xây dựng đường chuẩn bạn cần phải các chọn dung dịch chuẩn sao cho giá trị mật độ quang không nằm ngoài giới hạn đó. Tương tự, đối với dung dịch cần phân tích bạn co thể pha loảng (nếu cần thiết) để thu được giá trị năm trong khoảng nói trên. Chúc thành công!
Bạn cho mình hỏi để có đường chuẩn như thế thì mình phải mua dung dịch chuẩn của tất cả các axit amin có trong mẫu của mình sao ?